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液相内毒素清除剂图片
产品货号:
GS2313
中文名称:
液相内毒素清除剂
英文名称:
DNA-ES Reagents P Endotoxin-Be-Gone
产品规格:
5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

去除液体生物样品(包括质粒DNA样品)中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义,因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖,即lipopolysaccharides)是包括E.coli在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分,并且带电性跟DNA类似,所以从E.coli细胞中提取的质粒DNA和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染,并且很难用用常规方法(包括硅胶膜吸附,离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心)去除。本制品就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。




  • 简单快速,一次处理只需要20分钟左右,不需要复杂仪器设备。
  • 高效,一次处理可以去除90%以上的内毒素,经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到0.2 EU/ml以下。
  • 适用范围广,可用于DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。
  • 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
  • 既可小规模使用(在1.5mL离心管内),也可放量使用。



组分规格
液相内毒素清除剂5mL
说明书1份

保存:4℃


如果使用前本制品有分层,冰浴后振荡混匀。
  • 用于体积小于500μL的DNA/RNA样品
    • 在一干净的离心管中加入500μL的样品。如果不足500μL,可以用水或TE补足。
    • 加入50μL的3M醋酸钠(pH5.2),混匀后冰浴5分钟。
    • 加入50μL预冷的本制品,充分混匀后冰浴10分钟。
    • 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要1~5分钟)。
    • 室温12000~15000×g离心2分钟(不能低温离心),离心后上层为无色透明,下层为淡蓝色。
    • 将上清转移到新的离心管中。
    • 如果需要,可以重复步骤c~f。
    • 加1倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀,15000×g离心30分钟。
    • 弃上清后用70%酒精洗2次。
    • 空气干燥沉淀后加入100μL无内毒素的水或TE缓冲液溶解沉淀。
    • 测定DNA和内毒素的含量,与未纯化的样品比较。
  • 用于体积大于500μL的DNA/RNA样品整个操作同上,只是在15或50mL塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力。
  • 整合到碱变性法质粒DNA制备过程中整个操作同上,只是:
    • 样品必须是加溶液III离心后得到的上清液。
    • 可以略去第b步操作。
    • 第f步以后可以重复步骤c~f几次,也可以直接用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度,然后上柱,以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。与柱吸附相关溶液都必须无内毒素污染。
  • 对蛋白质和其它生物样品整个操作同上,只是:
    • 略去第b步操作,加3M醋酸钠(pH5.2)只为沉淀核酸。
    • 第d步改为37℃保温以免蛋白质变性,溶液呈混浊状或分相一般需要20~30分钟。
    • 略去第h步和以后操作。



  • 为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
    因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同,所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附,离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子),能够形成大小不等的聚合物,跟质粒DNA和蛋白质大小接近,所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

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